The spreading of Alfalfa mosaic virus in lavandin in Croatia
Širenje virusa mozaika lucerke u usevu lavande u Hrvatskoj
View/ Open
Author
Stankovic, Ivana
Vrandecic, Karolina
Cosic, Jasenka
Milojevic, Katarina
Bulajic, Aleksandra
Krstic, Branka
Keywords
Alfalfa mosaic virusLavandin
Molecular detection
Phylogenetic analysis
Croatia
Virus mozaika lucerke
lavanda
molekularna detekcija
filogenetska analiza
Metadata
Show full item recordAbstract
A survey was conducted in 2012 and 2013 to detect the presence and distribution
of Alfalfa mosaic virus (AMV) in lavandin crops growing in continental parts of Croatia.
A total of 73 lavandin samples from six crops in different localities were collected and
analyzed for the presence of AMV and Cucumber mosaic virus (CMV) using commercial
double-antibody sandwich (DAS)-ELISA kits. AMV was detected serologically in 62 samples
collected at three different localities, and none of the samples tested positive for CMV.
For further analyses, six selected samples of naturally infected lavandin plants originating
from different localities were mechanically transmitted to test plants: Chenopodium
quinoa, C. amaranticolor, Nicotiana benthamiana and Ocimum basilicum, confirming the
infectious nature of the disease. Molecular detection was performed by amplification of
a 751 bp fragment in all tested samples, using the specific primers CP AMV1/CP AMV2
that amplify the part of the coat protein (CP) gene and 3’-UTR. The RT-PCR products
derived from the isolates 371-13 and 373-13 were sequenced (KJ504107 and KJ504108,
respectively) and compared with the AMV sequences available in GenBank. CP sequence
analysis, conducted using the MEGA5 software, revealed that the isolate 371-13 had the
highest nucleotide identity of 99.5% (100% amino acid identity) with an isolate from
Argentina originating from Medicago sativa (KC881010), while the sequence of isolate
373-13 had the highest identity with an Italian AMV isolate from Lavandula stoechas
(FN667967) of 98.6% (99% amino acid identity). Phylogenetic analysis revealed the
clustering of selected isolates into four molecular groups and the lavandin AMV isolates
from Croatia grouped into two distinct groups, implying a significant variability within the AMV
lavandin population. Tokom 2012. i 2013. godine sprovedena su istraživanja u cilju utvrđivanja prisustva i
rasprostranjenosti virusa mozaika lucerke (Alfalfa mosaic virus, AMV) u usevu lavande u
kontinentalnom delu Hrvatske. Sa šest lokaliteta gajenja ukupno je sakupljeno 73 uzorka
lavande koji su serološki testirani na prisustvo AMV i virusa mozaika krastavca (Cucumber
mosaic virus, CMV) korišćenjem komercijalno dostupnih kitova za DAS-ELISA test. Prisustvo
AMV dokazano je u 62 uzorka lavande sakupljena sa tri različita lokaliteta, dok prisustvo
CMV nije dokazano ni u jednom od testiranih uzoraka. Za dalja istraživanja odabrano je šest
uzoraka prirodno zaraženih biljaka lavande poreklom iz različitih lokaliteta, koji su uspešno
preneti mehaničkim inokulacijama na test biljke Chenopodium quinoa, C. amaranticolor,
Nicotiana benthamiana, i Ocimum basilicum, čime je potvrđena infektivna priroda oboljenja.
Molekularna detekcija obavljena je amplifikacijom fragmenta dužine 751 bp kod svih ispitivanih
izolata korišćenjem specifičnih prajmera CP AMV1/CP AMV2 koji omogućavaju umnožavanje
dela gena za proteinski omotač i 3’ neprepisujućeg regiona. U cilju dalje identifikacije,
RT-PCR produkti izolata 371-13 i 373-13 su sekvencionisani (KJ504107 i KJ504108) i upoređeni
sa AMV sekvencama dostupnim u GenBank bazi podataka. Analizom sekvenci gena za protein
omotača, korišćenjem MEGA5 softverskog paketa, najviši stepen nukleotidne sličnosti od
99.7% (100% aminokiselinska sličnost) izolat 371-13 pokazao je sa izolatom AMV iz Argentine
poreklom iz Medicago sativa (KC881010), dok sekvenca izolata 373-13 najveću sličnost od
98.6% (99% aminokiselinska sličnost) deli sa italijanskim izolatom AMV iz Lavandula stoechas
(FN667967). Filogenetska analiza pokazala je grupisanje izolata u četiri molekularne grupe, a
izolati AMV iz lavande iz Hrvatske grupišu se u dve odvojene grupe, ukazujući na postojanje
značajne varijabilnosti u populaciji AMV poreklom iz lavande.